PCR實驗室設計原則.得創實驗室工程專業從事pcr實驗室工程規劃，設計，施工一條路凈化工程公司，歡迎來電咨詢：027-82289886
我們之前碰到過一些客戶，說做PCR實驗總是出現假陽性，明明沒有加模板最后卻擴出了產物。如果這種現象頻頻出現，就要注意一下操作環境了。如果你去百度上搜索“PCR出現假陽性了怎么辦”，下面給出的建議一定會有防止交叉污染這條建議。有人說模板DNA是大分子，溶于去離子水中，怎么會無緣無故跑出來污染環境呢？小編將會一一解釋。

位置的選擇應根據以下要求和技術經濟方案的比較確定:
1、應在大氣含塵濃度較低、自然環境較好的地區；
2、應遠離鐵路、碼頭、機場、交通動脈、工廠、倉庫、堆場等嚴重空氣污染、振動或噪聲干擾區域，如不遠離嚴重空氣污染源，應位于最大風向風側，或全年最小風向風側；
3、應布置在廠區內環境清潔、人流不穿越或少穿越的地區。
對于具有微振動控制要求的潔凈廠房的位置選擇，應實際測量周圍現有振源的振動影響，并分析比較精密設備和精密儀器的允許環境振動值。
實驗室與煙囪之間的水平距離不應小于煙囪高度的12倍。
實驗室與交通干道之間的距離不宜小于50米。
實驗室周圍應設置環形消防車道(可使用交通道路)。如有困難，可沿廠房兩條長邊設置消防車道。
實驗室周圍的路面，應選用整體性好、灰塵少的材料。
實驗室周圍應進行綠化。可以種植草坪，種植對大氣中粉塵濃度沒有有害影響的樹木，形成綠化社區，但不能阻礙消防作業。

PCR實驗室分區及區域功能
PCR實驗室分為四個區域，進?各?作區域必須嚴格按照單??向進?，不同的?作區域使?不同的?作服（例如不同的顏
?）。?作?員離開各?作區域時，不得將?作服帶出，四區域分別為：1.試劑配制區2.樣品處理區3.核酸擴增區4.產物分析區如使?全?動分析儀，區域可適當合并,三四區可合并為擴增產物分析。
各區的功能：完備的實驗室配套設施是保證實驗?作的必要條件，應根據各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器，如超凈?作臺、離?機、加樣器等。
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求，但是為避免各個實驗區域間交叉污染的可能性，宜采?全送全排的?流組織形式。同時，要嚴格控制送、排風的?例以保證各實驗區的壓?要求。
1、試劑貯存和準備區 該實驗區主要進?的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和?于標本制作的材料應直接運送?該區，不得經過其他區域。試劑原材料必須貯存在本區內，并在本區內制備成所需的貯存試劑。 對與?流壓?的控制，本區并沒有嚴格的要求。
2、標本制備區 該區域主要進?的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加??擴增反應管和測定RNA時 DNA的合成。本區的壓?梯度要求為：相對于鄰近區域為正壓，以避免從鄰近區進?本區的?溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發??溶膠所致的污染，所以應避免在本區內不必要的?動。
擴增反應混合物配制和擴增區 該區域主要進?的操作為DNA或DNA擴增。ft外，已制備的DNA模板和合成的DNA(來?樣本制備區)的加?和主反應混合液(來?試劑貯存和制備區)制備成反應混合液等也可在本區內進?。在巢式PCR測定中，通 常在第?輪擴增后必須打開反應管，因ft巢式擴增有較?的污染危險性，第?次加樣必須在本區內進?。 本區的壓?梯度要 求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免?溶膠從本區漏出。為避免?溶膠所致的污染，應盡量減少在本區內的不必要的?動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進?。
4、擴增產物分析區該區域主要進?的操作為擴增?段的測定。如使?全?動封閉分析儀器檢測，ft區域可不設。本區是最主要的擴增產物污染來源，因ft對本區的壓?梯度的要求為：相對于鄰近區域為負壓，以避免擴增產物從本區擴散?其它區域。
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PCR實驗室空調通風系統設計及壓力控制
PCR實驗室沒有嚴格的凈化要求，但為了避免各實驗區之間交叉污染的可能性，應采用全送全排的氣流組織形式。同時，應嚴格控制輸送和排氣的比例，以確保每個試驗區的壓力要求。
3.1.試劑儲存和準備區域
實驗區的主要操作是儲存試劑的制備、試劑的包裝和主要反應混合物的制備。用于標本生產的試劑和材料應直接運輸到該區域，不得通過其他區域。試劑原料必須儲存在該區域，并制備所需的儲存試劑。
對個區域對氣流壓力的控制沒有嚴格的要求。
3.2標本制備區
該地區的主要操作是保存臨床標本和核酸(RNA、DNA)提取、存儲和添加到擴增反應管和測定RNA時DNA的合成。
該區域的壓力梯度要求為：相對于相鄰區域的正壓，以避免從相鄰區域進入該區域的氣溶膠污染。此外，由于在樣品添加過程中可能會發生氣溶膠污染，因此應避免在該區域不必要的行走。
3.3.擴增反應混合物的制備和擴增區域
該區域的主要操作是DNA或DNA擴大。此外，已制備的DNA合成模板DNA(來自樣品制備區)添加和主反應混合物(來自試劑儲存和制備區)制備反應混合物也可在本區進行。PCR在測量中，反應管通常必須在第一輪擴增后打開，因此巢式擴增具有較高的污染風險，第二次加樣必須在該區域進行。
該區域的壓力梯度要求為：相對于相鄰區域的負壓，以避免氣溶膠從該區域泄漏。為了避免氣溶膠造成的污染，應盡量減少在該地區不必要的行走。應在超平臺上進行個別操作，如添加樣品。
3.4擴大產品分析區域
該區域的主要操作是測量擴增片段。如果使用全自動封閉分析儀進行檢測，則不能設置該區域。
該區域是擴增產物污染的主要來源，因此該區域的壓力梯度要求為：相對于相鄰區域的負壓，以避免擴增產物從該區域擴散到其他區域。
4預防和控制污染
PCR實驗室規劃設計的核心問題是如何避免污染。在實踐中，有幾種常見的污染類型：擴大產物污染；自然基因組DNA污染；試劑和標本之間的污染。一旦發生污染，必須停止實驗，直到找到污染源，實驗結果必須無效，需要重新進行實驗。因此，在污染發生后，在實驗室周圍尋找污染源不僅需要時間和繁瑣，而且浪費人力和物力資源。因此，為了避免污染，首先應該是預防，而不是排除。

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