pcr實驗室平面布局
PCR擴增檢測實驗室正常情況下分成四個獨立的工作中區(qū)域:試劑存儲和提前準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本采集制取區(qū)、擴增反映化合物配置和擴增區(qū)、擴增物質(zhì)剖析區(qū)。為防止交叉式污染,進到每個工作中區(qū)域務(wù)必嚴(yán)苛遵照單一方位開展,即只有從試劑存儲和提前準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本采集制取區(qū)→擴增反映化合物配置和擴增區(qū)→擴增物質(zhì)剖析區(qū)。
實驗室中央空調(diào)排風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計方案及工作壓力操縱
PCR實驗室并沒有嚴(yán)苛的凈化處理規(guī)定,可是為防止每個實驗區(qū)域間交叉式污染的概率,宜選用全送全排的自然通風(fēng)方式。與此同時,要嚴(yán)控送、排風(fēng)系統(tǒng)的占比以確保各實驗區(qū)的工作壓力規(guī)定。
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PCR試劑存儲和提前準(zhǔn)備區(qū)
該實驗區(qū)關(guān)鍵開展的實際操作為存儲試劑的制取、試劑的散裝和主反映溶液的制取。試劑和用以試品制做的原材料應(yīng)立即運輸至該區(qū)域,不可歷經(jīng)別的區(qū)域。試劑原料務(wù)必存儲在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制取成所需的存儲試劑。
對與氣旋工作壓力的操縱,本區(qū)并沒有嚴(yán)苛的規(guī)定。
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PCR標(biāo)本采集制取區(qū)
該區(qū)域關(guān)鍵開展的實際操作為樣版的儲存、核苷酸(RNA、DNA)獲取、存儲以及添加至擴增反映管和測量DNA的生成。
本區(qū)的滲透壓力規(guī)定為:相對性于相鄰區(qū)域為正壓力,以防止從相鄰區(qū)進到本區(qū)的大氣氣溶膠污染。此外,因為在加樣實際操作中很有可能會產(chǎn)生大氣氣溶膠而致的污染,因此應(yīng)防止在本區(qū)內(nèi)多余的行走。
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擴增反映化合物配置和擴增區(qū)
該區(qū)域關(guān)鍵開展的實際操作為DNA擴增。除此之外,已制取的DNA模版 (來源于樣版制取區(qū))的添加和主反映溶液(來源于試劑存儲和制取區(qū))制取成反映溶液等也可在本區(qū)內(nèi)開展。
本區(qū)的滲透壓力規(guī)定為:相對性于相鄰區(qū)域為負(fù)壓力,以防止大氣氣溶膠從本區(qū)露出。為防止大氣氣溶膠而致的污染,應(yīng)盡量避免在本區(qū)內(nèi)的多余的行走。某些實際操作如加樣等應(yīng)在超凈工作臺內(nèi)開展。
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擴增物質(zhì)剖析區(qū)
該區(qū)域關(guān)鍵開展的實際操作為擴增精彩片段的測量。
本區(qū)是最關(guān)鍵的擴增物質(zhì)污染來源于,因而對本區(qū)的滲透壓力的規(guī)定為:相對性于相鄰區(qū)域為負(fù)壓力,以防止擴增物質(zhì)從本區(qū)蔓延至其他區(qū)域。
污染的防止與操縱
pcr實驗室設(shè)計方案的關(guān)鍵難題是怎樣防止污染。在具體工作上,普遍的有下列幾類污染種類:擴增物質(zhì)的污染;純天然基因DNA的污染;試劑的污染及其標(biāo)本采集間的污染。因為一旦產(chǎn)生污染,實驗就務(wù)必終止,直至尋找污染源截止,并且實驗結(jié)果務(wù)必廢止,需再次開展實驗。因此產(chǎn)生污染后再緊緊圍繞實驗室來找尋污染源不僅用時并且繁雜,消耗財力物力。因而要防止污染,最先該是防止,而不是清除。