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PCR實驗室在設計中應該注重什么呢?
實驗室可分為兩大功能工作區:核酸擴增前區和核酸擴增后區。
核酸擴增前區域包括試劑制備室和樣品制備室。兩個房間各自獨立,沒有任何空氣互通。兩個房間相對于外部空氣壓力處于正壓狀態。核酸擴增后區域包括擴增區 域和產物分析區域,其可以使用實時熒光PCR儀器、 HIV病毒載量測定器的PCR實驗室組合成一個房間。如果該區域分為兩個房間,則兩個房間也必須各自獨立,不 能有空中互通。后擴增區對外部空氣壓力處負壓狀態。
實驗室根據儀器的功能設置各種工作區域。例如,使用聚合酶聯反應:設置試劑儲存和準備區域、標本制備區域、擴增區域、擴增產物分析區域四個獨立的工作 區域,這是最常用的分區方法。如果需要粉碎樣品,則需要添加樣品破碎區;如果使用實時熒光PCR法:基因擴增區域、基因產物分析區域可以組合在一個房間;采用 標本處理、核酸提取和擴增檢測為一體的自動PCR分析儀,則樣品制備區域、擴增區域、擴增產物分析區域可以組合成一個區域,因此PCR實驗室原則上設置五個區 域或四個區域或三個區域或兩個獨立的工作區域。
實驗室設備是保障工作質量不可或缺的配置。在PCR實驗室設計中,應根據每個實驗室的要求提供不同的儀器和設備,如:離心機、生物安全柜、超潔凈工作臺、電泳(插槽)、電轉儀、雜交箱、水浴箱、 DNA測序儀、酶標儀和洗板機等等。
實驗室作為一種分子生物學技術,可以放大DNA片段,利用DNA基因跟蹤系統更快,更準確地檢測人體內的病毒含量。它為醫學治療提供可靠依據,為人們帶來了先進的、快速的、高效的醫療依據。
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pcr實驗室設計的基本原則
實驗室建設網
能將微量的DNA大幅增加,是分子生物學研究和實驗的常規方法,PCR實驗室廣泛應用于生物學各個領域,例如:艾滋病檢測,乙型肝炎,禽疫病,癌基因的檢測和診斷,DNA指紋,個體識別,親子鑒定及法醫物證等等,今天實驗室建設網為大家進行詳解pcr實驗室設計的基本原則。
PCR實驗室設計
一、PCR實驗室布局設計
PCR實驗室原則上為試劑準備區,樣品制備區,擴增區和擴增產物分析區四個單獨的工作區域,并設有專用走廊,各工作區域應設緩沖間,工作區與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區應是分隔獨立的,各工作區有明顯的標志,不能直通,如果緊密連接,需安裝物品傳遞窗。前兩區為擴增前區,后兩區為擴增后區,即從:試劑準備區一樣品制備區一 PCR 擴增室一產物分析室 ,不得逆向流動。實驗室的氣流也應從擴增前區流向擴增后區,不得逆向流動。各工作區頂部應該安裝紫外燈,紫外燈波長為254mm,每20m一支40W的紫外燈。
二、實驗室功能區設計及主要設備
1.試劑準備區:主要進行試劑的制備,分裝和主反應混合液的制備。試劑盒用于樣品制作的材料應直接運送至該區域。試劑原材料必須貯存在本區內,并在本區內制備成所需的試劑。本區主要設備有天平,冰箱,離心機,加樣器,振蕩器等。對于氣流壓力的控制,本區并沒有嚴格的要求, 一般為+10Pa。
2.樣品制備區:主要進行樣品的保存,核酸提取,貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區主要設備有冰箱,生物安全柜,離心機,加樣器,振蕩器等。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為正壓,以避免從鄰近區進入本區的氣溶膠污染, 一般為+10Pa.
3.擴增區:主要進行DNA擴增。此外,已制備的DNA模板(來.自樣品制備區)的加入和主反應混合液(來自試劑準備區)制備成反應混合液等也可在本區內進行。本區主要設備有:擴增儀,冰箱,離心機,加樣器等。本區的壓力梯度要求為:相對于鄰近區域為負壓,以避免氣溶從本區漏出一般為一25Pa。
4.擴增產物分析區:擴增產物的測定。本區主要設備有酶標儀,洗板機、加樣器和水浴箱等。本區的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區域為負壓,一般為一25Pa,以避免擴增產物從本區擴散至其它區域。
三、PCR實驗室通風系統及壓力控制
各區域之間應具備單間的實驗工藝流,物流,人流與氣流,形成單向流程的保護屏障, 避免實驗室之間的相互干擾,防止氣溶膠擴散對實驗過程造成污染。PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區域交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式,嚴格控制送,排風的比例以保證個實驗區的壓力要求。
四、PCR實驗室裝修
實驗室圍護結構應牢固, 氣密性好;
所有陰陽角宜采用圓弧過度;
墻體內壁光潔,不積塵,耐腐蝕,易清洗消毒;
地面使用PVC卷材或環氧樹脂自流坪,材料應滿足無縫隙,無滲漏,光潔,耐腐蝕的要求。
五、PCR實驗室設計施工注意事項
1.主體結構
PCR實驗室設計的主體材料為彩鋼板、鋁合金,為了解決積灰、積塵問題,實驗室內的所有陰角、陽角都必須采用鋁合金50內圓角鋁。此外,設計方面還要做到線條簡明、美觀大方,同時兼顧結構牢固、密封性好。
2.標準的三區分隔和氣壓調節
所謂標準的三區分隔,就是指在PCR實驗室設計時把其劃分為試劑準備、標本制備、PCR擴增檢測這3個獨立區域。要有1條整體緩沖走廊來連接3個獨立區域,且每個獨立區域都有專門的緩沖區。
所謂氣壓調節,就是實驗室內的空氣氣壓的調節,這樣可以避免實驗中的樣品污染,也能降低擴增產物對人員和環境的污染。那么,如何進行氣壓調節呢?可以打開緩沖區Ⅰ、Ⅱ和 PCR 擴增區的排風扇往外排氣,并在實驗區墻上和各扇門上都安裝有風量可調的回風口。
3.消毒
在獨立區域、緩沖區頂部與傳送窗內部都必須安設用于消毒的紫外燈。此外,在試劑準備區、標本制備區還要安設移動紫外線燈,以便對實驗桌進行局部消毒。
4.機械連鎖不銹鋼傳遞窗
不銹鋼傳遞窗有機械連鎖、電子連鎖兩種,建議在PCR實驗室設計時采用前者。這樣,能有效確保試劑和標本通過傳遞窗時不受污染。
5.地面
為了地面的整體性,以及耐腐蝕、易清潔,建議選擇自流坪地坪或PVC地坪。如果預算有限,建議選擇水磨石地坪或大塊的瓷磚。
6.照明
PCR實驗室內必須使用凈化燈具,因為這類燈具不積塵、易清潔。安裝凈化燈具要注意2點,即:規范的安裝流程和全面的服務流程、嚴格按照規范科學設計的安裝流程。
7.樣本處理區
PCR實驗室的樣本處理區要劃分為4個部分,即:試劑配制區、樣品處理區、核酸擴增區、產物分析區。如使用全自動分析儀,區域可適當合并。
干細胞制備實驗室建設解決方案
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