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PCR實驗室設計規范,安裝方法

  • Jason Peng

  • Product Manager for PCR實驗室設計規范,安裝方法,Engaged in related product development for 15 years,with a wealth of related technical experience

  • 2022-12-14  |  Visits:


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PCR實驗室設計

PCR實驗室主要實驗項目:病毒檢測,乙型肝炎,禽疫病,癌基因的檢測和診斷,DNA指紋,個體識別,親子鑒定及法醫物證等等。
PCR實驗室建設原則上分為四個單獨的工作區域:試劑貯存和準備區、標本制備區、擴增反應混合物配制和擴增區、擴增產物分析區。
1、試劑準備區:用于試驗試劑的準備。
該區域為正壓,目的是防止污染物質溢入。該區域內部又可分為3個區域:普通提取試劑的準備區、PCR試劑準備區和PCR主反應液準備區。在普通提取試劑的準備區內準備一些樣品核酸提取時所需的裂解液、提取液等;PCR試劑準備區用于PCR試劑的制備和保存。例如準備引物、探針等PCR試劑。為了防止交叉污染,避免反復冷凍和解凍,試劑存貯溶液應該被平均為小的工作體積,儲存在這個房間以備后用:PCR主反應液準備區將進行主反應混合液(除了樣品。所有PCR所需試劑的混合)添加到PCR管的操作。重要提示:不能將其它房間的材料(包括擴增、模板和目標核酸或陽性對照、供應品、或設備)帶進試劑準備區。
2、樣品準備區:該區域無壓力設置要求。
該區域是用于對樣品進行分樣,將樣品進行研磨、粉碎、勻漿的區域。由于在這些粉碎、研磨和勻漿處理過程中會產生氣溶膠,因此,存在陽性樣品污染后續操作的可能性。該區域與后面的區域應嚴格隔離,應放在與后面的三個區域隔開的獨立的房間中。在樣品準備區內還可設立一個專用的封閉區或房間用于樣品的接收和儲存。這個房間可以放置冰箱用于樣品儲存,應該和樣品準備區其它區域隔離開。樣品準備區域的人員不得進入試劑準備區。
3、核酸提取區:核酸提取區是進行樣品核酸提取的區域。
該區域為負壓,目的是防止核酸溢出造成污染。樣品準備區又包括從樣品中進行核酸提取和純化的區域以及將核酸加到包含PCR主反應混合液管中的操作區域。添加完樣品后,PCR管的蓋子要盡可能快地蓋好。使用PCR板和膠蓋時,陽性對照和含目標序列的樣品要與待測樣本分開操作,以避免模板添加時造成交叉污染
重要提示:這個房間里的一切物品不得帶人試劑準備區。
4、擴增和產品檢測區:該區域是用來進行PCR擴增和PCR分析。
PER儀放置在這個區域。房間保持負壓,目的是防止核酸溢出。在該區域人員一定要一直穿戴工作服和手套,在離開房間前脫去,防止擴增子污染其它地點。所有用于擴增和產品檢測的設備要指定用于這個房間。PCR分析]二作也設置在該區域,例如:酶切、測序、克隆等,但實驗室應盡可能把這些活動分隔在不同區域或不同房間。以降低擴增產物的污染風險。如果沒有條件在該區域設立負壓,此區域必須建立排風裝置。

PCR實驗室設計效果圖 PCR實驗室設計效果圖
   

PCR實驗室設計必須設計走廊嗎?

實驗室建設網
PCR實驗室又稱為基因擴增實驗室,是一種分子生物學技術,用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復制。通過DNA基因追蹤系統,能迅速掌握患者體內的病毒含量,其精確度高達納米級別,精確檢測乙肝病毒在患者體內存在的數量、是否復制、是否傳染、傳染性有多強、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗依據。
PCR實驗室設計
一、PCR實驗室基本結構
PCR實驗室基本由四大結構組成,常見為:試劑準備區、制備區、擴增區和擴增分析區。
二、基本功能介紹:
1、準備區:主要進行實驗所需試劑的準備工作,分裝等,由傳遞窗運送至制備區,嚴禁走人員通道。
2、制備區:主要進行樣品等保存,DNA/RNA的提取、貯存和其加入至擴增反應管和測定DNA/RNA的合成。
3、擴增區:主要進行DNA的擴增,已制備的DNA模版和合成的cDNA的加入和主板反應混合液制備成反應混合液等也可在擴增區內進行,在巢式PCR測定中,通常在首次擴增后必須打開反應管,因此巢式擴增有較高等污染危害性,二次加樣必須在本區完成。
4、擴增分析:主要用來做擴增產物的測定,本區是主要的擴增產物污染來源,因此必須主意避免通過本區的物品或者工作服將擴增產物帶出。
三、PCR實驗室的走廊、傳遞窗設計常識
1. PCR走廊:并不是標配,進深不夠時不要做PCR走廊,且PCR走廊會增加交叉污染。
這4個分區(試劑儲存和準備區、標本制備區、核算擴增區、產物分析區)原本就不需連接在一起。且在物理空間上必須是完全相互獨立的,各區域無論在空間上還是在使用中,應當始終處于完全的分隔狀態,不能有空氣的直接相通。
2. 傳遞窗:并非必須設置(只要不涉及潔/污分流就不需要設置傳遞窗),但一般實驗機構/實驗人員喜歡設置。
傳遞窗的本質同緩沖間,是物流的緩沖間。在PCRclass="wpcom_keyword_link"實驗室設計中,試劑準備和標本制備間是重點保護的區域,此處最好不要加傳遞窗,防止交叉污染。實驗中的污染風險主要來自于核酸擴增時的加樣行為,但由于操作在生物安全柜內進行,且確保空氣不外溢,因此不存在污染。
中國生物建設的新冠疫苗P3實驗室和P3生產車間進展順利

PCR實驗室設計效果圖 PCR實驗室設計效果圖
   

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