我院pcr實驗室順利建成并投入使用

如何建立標準的PCR實驗室？PCR實驗室如何設計計劃是專業的？PCR實驗室管理有什么注意事項？本文從0開始理解PCR實驗室的計劃設計。

一、PCR實驗室分區

標準的PCR實驗室分為4個區域，分別為

n1.試劑配制區域

n2.樣品處理區域；

n3.核酸擴張區域

產物分析區域

核酸擴張區域

(進入各工作區必須嚴格按單向進行，不同工作區使用不同的工作服，如顏色。工作人員離開各工作區時，不得帶出工作服)

二、PCR實驗室平面布局

試劑準備區:擴大試劑的配置、分裝和保存

樣品處理區:樣品注冊、分裝核酸提取、保存和樣品

擴大產物分析區:擴大產物的測定、結果分析、注冊和報告

擴張前區和擴張后區應嚴格分開，使用不同的房間，兩區之間最好有一定的間隔

使用商品化試劑盒可在樣品處理區進行少量試劑配制

在滿足以下操作和清潔處理要求的前提下，樣品處理區域的準備區域可以設置在同一個房間內:

在生物安全柜內操作的

每個實驗者、實驗組分別使用各自的試劑和消耗品#

放置污染材料的器密封并一次性使用。

pcr實驗室建設計劃要點

將PCR過程分為試劑準備、標本準備和PCR擴展檢查三個獨立的實驗區。整個區域都有整體緩沖走廊。各獨立實驗區設有緩沖區，同時各區通過氣壓調節，在PCR實驗中試劑和標本不受氣溶膠污染，減少擴大產物對人員和環境的污染

可開緩沖區I，緩沖區ii和PCR擴大區的排氣扇向外排氣，實驗區的外墻和各門都設置了風量可調的回氣口，空氣通過回氣口向室內通風

在三個實驗區和三個緩沖區的上部和傳輸窗內部設置紫外線燈，供消毒

在試劑備考區和標本制備區，還設置了移動紫外線燈，對實驗桌進行局部消毒

試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼(不推薦電子連鎖方式)傳輸窗口，保證試劑和標本在傳輸過程中不受污染(人物分流)

照明器具選擇凈化照明器具，具有清洗方便、不積塵的特點。

PCR實驗室核酸檢測這個小細節不能忽視！

三、設計要點

PCR實驗室可以是分散形式，也可以是組合形式。完成一組PCR實驗，通常經過試劑配制、樣品處理、核酸擴張和產物分析四個實驗過程，如果需要實驗過程，還需要增加樣品粉碎過程。

所謂分散形式PCR實驗室，是指完成上述實驗過程的實驗室相距甚遠，呈分散布置形式。對于這種布局形式的PCR實驗室，每個實驗之間都不容易相互干擾，所以不需要特殊的條件要求。

所謂組合形式PCR實驗室是指完成PCR四個實驗過程的實驗室相鄰配置，構成獨立實驗區域的形式。組合形式的PCR實驗室，由于各實驗之間的集中配置容易引起相互干擾，因此對整體配置和屏障系統有一定的要求。各室在入口處設置緩沖間，減少室內外空氣交換。

試劑調配室和樣品處理室應微正壓，防止外部含有核酸氣溶膠的空氣進入，造成污染的

核酸擴張室和產物分析室應呈微負壓，防止含有核酸的氣溶膠擴張污染試劑和樣品，控制排氣量比吸氣量大，達到負壓效果。

理想的情況下，PCR實驗室緩沖間內，可設置正壓，使室內空氣不流向室外，室外空氣不流向室內。PCR實驗室的吸氣由原來的中央空調控制，要求將中央空調的吸氣口設置在指定點，高度鋪在地板上后2600mm。

使用熒光PCR儀，擴展室和產物分析室可合并。

如果房間深入允許，可以設置PCR內部的專用走廊。需要指出的是，在減少室內外空氣交換方面，緩沖間比專用走廊更有意義。

各地區之間應具備單向的實驗流程、物流、人流和氣流，形成單向流程的保護屏障，避免實驗之間的相互干擾，防止核酸氣溶膠對實驗過程造成的污染產生假性結果。

實驗室的墻壁，包括天花板在內，結構牢固，氣密性好，所有陰角都應采用圓弧線過渡的墻壁內壁清潔，不吸附，耐腐蝕，容易清洗消毒的地板材料

儀器設備主要有冰箱、超凈臺、打樣機、混勻機、天平和離心機等，打樣機、天平除專用外，還應定期校準。試劑分裝應在超凈臺進行，擴大反應混合液應使用分子生物學級，試劑制作后應進行質量檢查。一個是否有污染，二個是檢查試劑的擴大效果。

儀器設備主要包括生物安全柜、加樣器、離心機、溫育器、混合器等

擴展區的主要儀器是核酸擴展器、超凈臺、微量增加器、可動紫外燈。擴展器需要校準。配備UPS電源，防止電壓變動，停電影響擴大效果。

本區使用的儀器設備有酶標儀、洗板機、樣品器和水浴箱等潔凈實驗區的緩沖間面積不得超過主實驗室的八分之一。

四、一些瑣碎、不可忽視的設計

PCR實驗室沒有嚴格的凈化要求，但為了避免各實驗區間的交叉污染，應采用全排氣流組織形式。同時，要嚴格控制輸送、排氣的比例，保證各實驗區的壓力要求。

PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中，常見的有擴大產物污染的天然基因組DNA污染的試劑污染和標本之間的污染。一旦發生污染，實驗必須停止，直到找到污染源，實驗結果必須無效，必須重新進行實驗。因此，污染發生后，圍繞實驗室尋找污染源不僅花費時間，而且麻煩，浪費人力物資。為了避免污染，必須首先預防，而不是排除。

(1)嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得擅自進出實驗室。有條件時，必須設置獨立的通道和進出整個實驗區的門。

(2)盡量減少實驗區內不必要的行走，減少交叉污染的可能性。

(3)擴大產物分析區是最主要的擴大產物污染源，廢液不能倒入實驗室，必須用消毒液浸泡消毒后，在遠離實驗室的地方放棄，使用的吸引器等一次性材料也必須用消毒液浸泡消毒后進行統一處理，如焚燒等3.5完善的實驗室輔助設施，完善的實驗室輔助設施是保證實驗作業的必要條件，必須根據各實驗室的實驗內容配備相應的設備和儀器。