潔凈室（無菌室）的使用和管理

潔凈室(無菌室)是微生物檢測的重要場所和最基本的設施，是微生物檢測質量保證的重要物質基礎。潔凈室(無菌室)標準應符合GMP潔凈度標準。

因此，潔凈室設計必須按照國家標準《潔凈現場設計規范》、國家藥品監督管理局發行的《藥品檢驗所實驗室質量管理規范(試行)》第18條規定執行。

微生物實驗室潔凈室的施工、設置、檢查應按照國家行業標準潔凈室的施工和檢查規范進行。對于微生物檢測工作者和使用管理者來說，更多的工作是正常管理到日常使用。

潔凈室(無菌室)的使用管理應實現以下工作:

1.潔凈室(無菌室)應符合規范要求

無菌實驗室裝修應采光良好，避免潮濕，遠廁所和污染區域。面積一般在10m2以下，在5m2以上的高度在2.4m以下。

由1~2個緩沖間、操作間構成(操作間和緩沖間的門不能直接對應)，操作間和緩沖間應具有滅菌功能的樣品傳遞箱。

緩沖室內應有洗臉盆、毛巾、無菌褲的放置架和掛鉤、拖鞋等，不得放置培養箱和其他垃圾的無菌室內應六面光滑平整，耐清洗消毒。墻壁和地板、天花板的連接處應呈凹弧形，無間隙，無死角。

操作期間不得安裝下水道。無菌操作室應具有空氣除菌過濾的單向流空氣裝置，操作區潔凈度為100級放置同等級超凈工作臺，室內溫度控制18-26℃，相對濕度45%-65%。

緩沖室和操作室應設置能夠達到空氣消毒效果的紫外線燈和其他適當的消毒裝置，空氣清潔水平不同的相鄰房間的靜壓差應大于5Pa，清潔室(區)和室外大氣的靜壓差應大于10Pa。

無菌室內照明燈嵌在天花板上，室內照明均勻分布，照明度在300lx以上。緩沖間和操作間設置的紫外線殺菌燈(2-2.5w/m3)應定期檢查放射強度，要求操作面達到40uw/m2。不符合要求的紫外殺菌燈應及時更換。

2.建立注冊制度

可在注冊簿上設置日期、時間、使用者、設備運行狀況、溫度、濕度、清潔狀態(沉降菌數、浮游菌數、塵埃粒子數)、修理原因、修理結果、清潔工作(桌面、地板、墻面、天花板、傳遞窗、門把手)、消毒液名稱等。

3.建立使用標準操作規范(SOP)

(2)物品進入潔凈室(無菌室)的基本要求:進入潔凈室(無菌室)的物品必須在第一緩沖室內用消毒劑消毒外部表面，在物流緩沖室、傳送窗戶1小時以上，無菌空氣干燥后送入無菌室。注意不要帶纖維、容易灰塵的東西去凈化實驗室。無菌室內固定物品不得隨意搬出。

(3)人員進入潔凈室(無菌室)要求:實驗人員進入潔凈室(無菌室)不得化妝、手表、戒指等飾品，不得吃、嚼口香糖。清潔手后，進入第一緩沖室更衣，同時更換消毒隔離拖鞋，脫下外套，用消毒液消毒手套，更換無菌連衣帽(不得暴露在外面)，戴無菌口罩。然后，更換或戴上第二個無菌手套，進入第二個緩沖間時更換第二個消毒隔離拖鞋。通過淋浴室30s淋浴進入無菌室。

(4)溫濕度觀察要求:觀察溫度計、濕度計顯示的溫濕度在規定范圍內，作為實驗原始數據記錄在案件中。如果發現問題，應及時找出原因，及時報告實驗室主管，并記錄報告原因和結果。

(5)沉降菌落計數和浮游菌測定要求:在每次實驗的同時，在操作室和層流臺上進行微生物沉降菌落計數，將結果記錄在使用登記本上，作為實驗環境的原始數據記錄在實驗報告書上。每周一次或無菌檢測等必要時，每次實驗同時對操作室和凈化臺進行浮游菌測量，將結果記錄在使用登記本上，作為實驗環境的原始數據記錄在實驗報告上。

(6)消毒要求:無菌室每周和每次操作前使用0.1%的新潔爾消毒或2%的甲酚液或其他適當的消毒液(常用消毒劑的品種為5-20倍稀釋的碘伏水溶液、0.1%的新潔爾消毒液、1:50的84消毒液、75%的羥基醇溶液、3%的碘酒溶液、5%的石炭酸(來蘇兒)消毒溶液、2%的二面水溶液、尼泊金乙醇消毒液(處方:對基苯甲酸甲酯21.5g的清潔消毒程序應從內向外，從高潔凈區到低潔凈區。逐漸向外退出清潔區域。然后打開無菌空氣過濾器和紫外線燈殺菌1-2h，殺死微生物。每次操作結束，同樣用上述消毒溶液擦拭桌面，去除室內濕氣，用紫外線燈殺菌30min。無菌室是怎樣管理的

(7)其他要求:停電時，立即停止實驗，離開無菌室。關閉所有的電門。在重新進入無菌室之前，至少打開機械室運行1小時以上。

4.潔凈度檢測的要求和方法

無菌室消毒處理后，無菌試驗前和操作中必須檢查空氣中的落數，判斷無菌室是否達到規定的清潔度

(1)沉降菌檢測方法和標準:無菌方式將3個營養瓊脂平板帶入無菌操作室，在操作區的桌面左、中、右各放置1個平板蓋，在空氣中暴露30min后，將平板蓋在32.5℃

(2)浮游菌檢測方法和標準:使用專用采樣器，采用沖擊法機制的采樣器，一般采用狹縫式或離心式采樣器，配備流量計和定時器，嚴格按照儀器說明書的要求進行操作和定時校正，采樣器和培養器進入測量室前消毒室消毒劑滅菌，使用的培養基礎是營養瓊脂培養基礎和藥典認可的其他培養基礎。使用時，首先啟動真空泵抽氣，時間在5分鐘以上，調節流量、轉盤、轉速。關閉真空泵，放入培養盤，蓋上取樣罩，調節間隙高度。放置采樣口采樣點后，依次打開采樣器、真空泵，旋轉定時器，根據采樣量設定采樣時間。全部采樣結束后，將培養盤放置32.5℃士2.5培養48h，取出檢查，浮菌落數平均不得超過5個/m3。

每批培養基應選擇3個培養盤進行比較培養。無菌操作臺或超凈工作臺應定期檢測懸浮顆粒，達到100級(一般用塵粒計數器)檢測，根據無菌情況必要更換過濾器。

5.定期進行清潔度再驗證

定期(每季度、半年、一年)或清潔室設施發生重大變化時，按國家標準GB/T16292-16294-2010《醫藥工業清潔室(區)懸浮粒子、懸浮菌和沉降的測試方法》進行清潔度再驗證，確保清潔度符合規定

定期對潔凈室的環境檢測數據進行趨勢分析和評價，根據評價結果，了解潔凈室設施環境質量的穩定狀況和變化趨勢，決定是否需要修改相應的警戒和糾偏限度。

6.定期更換新的紫外線燈
更換凈化系統的初效、中效、高效的頭定期更換新的紫外線燈，確保紫外線燈的滅菌持續有效。同時在使用登記本上創建更換記錄，定期存檔保存。

至少2年1次，或者根據清潔度驗證實際情況，定期更換初效、中效、高效的頭部。確保凈化系統的功能持續有效，同時在使用注冊簿時制作交換記錄，定期存檔保存。

7.在使用過程中應盡量減少人員的行走或活動

平時實驗室內應盡量減少人員的行走或活動，同向潔凈室的門應關閉或安裝自動關閉門。

8.如果清潔度不符合規定，立即停止使用

如果發現清潔度不符合規定，立即停止使用，尋找原因，完全清潔，必須在清潔度檢驗符合規定后再使用

9.對進入的外來人員或維護人員進行指導和監督

非微生物室檢查人員不得進入潔凈室(無菌室)，對必須進入的外來人員或維護人員進行指導和監督。

10.潔凈室無菌室日常管理

建立安全衛生值日制度，發現換氣系統、墻壁、天花板、地板、門窗、公共介質系統等設施有損壞，應立即報告并采取相應的修復措施，保存記錄并立即歸檔。

從潔凈室(無菌室)環境中檢測到的微生物可以鑒別到屬或種類，保留鑒別實驗的原始記錄和菌種，作為無菌生產、無菌檢測潔凈室環境質量、消毒劑有效評價和污染源調查的依據，也為無菌檢測陽性的調查提供了第一手資料。
 

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